Китайська фармакопея (видання 2020 р.) вимагає, щоб метанольний екстракт YCH не був меншим за 20,0% [2], інші показники оцінки якості не вказані. Результати цього дослідження показують, що вміст метанолових екстрактів диких і культивованих зразків відповідав стандарту фармакопеї, і між ними не було істотної різниці. Таким чином, не було очевидної різниці в якості між дикими та культивованими зразками, відповідно до цього індексу. Проте вміст загальних стеринів і загальних флавоноїдів у диких зразках був значно вищим, ніж у культивованих. Подальший метаболомічний аналіз виявив велику різноманітність метаболітів між дикими та культивованими зразками. Крім того, було відібрано 97 істотно різних метаболітів, які перераховані вДодаткова таблиця S2. Серед цих суттєво різних метаболітів є β-ситостерин (ID — M397T42) і похідні кверцетину (M447T204_2), які, як повідомляється, є активними інгредієнтами. Раніше невідомі компоненти, такі як тригонеллін (M138T291_2), бетаїн (M118T277_2), фустин (M269T36), ротенон (M241T189), арктиїн (M557T165) і логанова кислота (M399T284_2), також були включені до диференціальних метаболітів. Ці компоненти відіграють різні ролі в антиоксидантній, протизапальній, поглинанні вільних радикалів, протираковій терапії та лікуванні атеросклерозу і, отже, можуть становити передбачувані нові активні компоненти в YCH. Вміст діючих речовин визначає ефективність і якість лікарських речовин [7]. Підводячи підсумок, метанольний екстракт як єдиний індекс оцінки якості YCH має деякі обмеження, і більш конкретні маркери якості потребують подальшого вивчення. Були значні відмінності в загальних стеролах, загальних флавоноїдах і вмісті багатьох інших диференціальних метаболітів між диким і культивованим YCH; отже, потенційно між ними були певні якісні відмінності. У той же час, нещодавно виявлені потенційні активні інгредієнти в YCH можуть мати важливе довідкове значення для вивчення функціональної основи YCH і подальшого розвитку ресурсів YCH.
Важливість справжніх лікарських матеріалів давно визнана в певному регіоні походження для виробництва китайських трав’яних ліків відмінної якості [
8]. Висока якість є неодмінною ознакою справжніх лікарських матеріалів, а середовище проживання є важливим фактором, що впливає на якість таких матеріалів. З тих пір, як YCH почали використовувати як ліки, у ньому довгий час домінував дикий YCH. Після успішного впровадження та одомашнення YCH у Нінся у 1980-х роках, джерело лікарських матеріалів Yinchaihu поступово перейшло з дикого YCH на культивований. Згідно з попереднім розслідуванням джерел YCH [
9] і польових досліджень нашої дослідницької групи, існують суттєві відмінності в ареалах поширення культивованих і дикорослих лікарських матеріалів. Дикий YCH в основному поширений в Нінся-Хуейському автономному районі провінції Шеньсі, що прилягає до посушливої зони Внутрішньої Монголії та центральної Нінся. Зокрема, пустельний степ на цих територіях є найбільш придатним середовищем для зростання YCH. Навпаки, культивований YCH в основному поширений на південь від дикої зони поширення, наприклад, у повіті Тунсінь (культивований I) та його прилеглих районах, який став найбільшою культиваційною та виробничою базою в Китаї, а також у повіті Pengyang (культивований II) , який розташований у південнішому районі та є ще одним районом виробництва культивованого YCH. Крім того, місцезростання цих двох культивованих територій не є пустельним степом. Тому, крім способу виробництва, існують також значні відмінності в середовищі існування дикого та культивованого YCH. Середовище існування є важливим фактором, що впливає на якість рослинної лікарської сировини. Різні середовища існування впливатимуть на утворення та накопичення вторинних метаболітів у рослинах, тим самим впливаючи на якість лікарських засобів [
10,
11]. Таким чином, значні відмінності у вмісті загальних флавоноїдів і загальних стеролів, а також експресії 53 метаболітів, які ми знайшли в цьому дослідженні, можуть бути результатом польового менеджменту та відмінностей середовищ існування.
Одним із основних способів впливу навколишнього середовища на якість лікарських матеріалів є вплив на вихідні рослини. Помірний екологічний стрес, як правило, стимулює накопичення вторинних метаболітів [
12,
13]. Гіпотеза балансу зростання/диференціації стверджує, що, коли поживних речовин достатньо, рослини в основному ростуть, тоді як при дефіциті поживних речовин рослини переважно диференціюються та виробляють більше вторинних метаболітів [
14]. Посуховий стрес, викликаний дефіцитом води, є основним екологічним стресом, з яким стикаються рослини в посушливих районах. У цьому дослідженні водний стан культивованого YCH є більш рясним, з річними рівнями опадів, значно вищими, ніж для дикого YCH (водопостачання для культивованого I було приблизно в 2 рази більше, ніж для дикого; культивованого II було приблизно в 3,5 рази більше, ніж для дикого ). Крім того, ґрунт у дикому середовищі є піщаним ґрунтом, але ґрунт на сільськогосподарських угіддях є глинистим. Порівняно з глинистим, піщаний ґрунт має слабку водоутримувальну здатність і, швидше за все, посилить стрес від посухи. Водночас процес вирощування часто супроводжувався поливами, тому ступінь посухового стресу був низьким. Дикий YCH росте в суворих природних посушливих середовищах існування, і тому може зазнати серйознішого стресу від посухи.
Осморегуляція є важливим фізіологічним механізмом, за допомогою якого рослини справляються зі стресом від посухи, а алкалоїди є важливими осмотичними регуляторами у вищих рослин [
15]. Бетаїни є водорозчинними алкалоїдами четвертинних амонієвих сполук і можуть діяти як осмопротектори. Посуховий стрес може знизити осмотичний потенціал клітин, тоді як осмопротектори зберігають і підтримують структуру та цілісність біологічних макромолекул, а також ефективно полегшують шкоду, спричинену посуховим стресом рослинам [
16]. Наприклад, під час посухи вміст бетаїну в цукровому буряку та Lycium barbarum значно збільшився [
17,
18]. Тригонеллін є регулятором росту клітин, і під час стресу від посухи він може подовжувати тривалість клітинного циклу рослин, пригнічувати ріст клітин і призводити до зменшення об’єму клітин. Відносне збільшення концентрації розчиненої речовини в клітині дозволяє рослині досягти осмотичної регуляції та підвищити її здатність протистояти посуховому стресу [
19]. JIA X [
20] виявили, що зі збільшенням посухового стресу Astragalus membranaceus (джерело традиційної китайської медицини) виробляє більше тригонеліну, який регулює осмотичний потенціал і покращує здатність протистояти посуховому стресу. Було також показано, що флавоноїди відіграють важливу роль у стійкості рослин до посухового стресу [
21,
22]. Велика кількість досліджень підтвердила, що помірний стрес від посухи сприяв накопиченню флавоноїдів. Lang Duo-Yong та ін. [
23] порівнювали вплив посухового стресу на YCH шляхом контролю водоутримуючої здатності в полі. Було виявлено, що посуховий стрес певною мірою пригнічував ріст коренів, але при помірному та сильному посуховому стресі (40% польової водоутримуючої здатності) загальний вміст флавоноїдів у YCH збільшився. Тим часом під час посухового стресу фітостероли можуть регулювати текучість і проникність клітинних мембран, пригнічувати втрату води та підвищувати стійкість до стресу [
24,
25]. Таким чином, підвищене накопичення загальних флавоноїдів, загальних стеролів, бетаїну, тригонеліну та інших вторинних метаболітів у дикому YCH може бути пов’язане з високоінтенсивним стресом від посухи.
У цьому дослідженні було проведено аналіз збагачення шляху KEGG для метаболітів, які, як було виявлено, значно відрізняються між диким і культивованим YCH. Збагачені метаболіти включали метаболіти, залучені в метаболізм аскорбату та альдарату, біосинтез аміноацил-тРНК, метаболізм гістидину та метаболізм бета-аланіну. Ці метаболічні шляхи тісно пов’язані з механізмами стійкості рослин до стресу. Серед них метаболізм аскорбату відіграє важливу роль у виробництві рослинними антиоксидантами, метаболізмі вуглецю та азоту, стресостійкості та інших фізіологічних функціях [
26]; Біосинтез аміноацил-тРНК є важливим шляхом утворення білка [
27,
28], який бере участь у синтезі стресостійких білків. І гістидиновий, і β-аланіновий шляхи можуть підвищити стійкість рослин до стресу навколишнього середовища [
29,
30]. Це додатково вказує на те, що відмінності в метаболітах між диким і культивованим YCH були тісно пов'язані з процесами стійкості до стресу.
Грунт є матеріальною основою для росту і розвитку лікарських рослин. Азот (N), фосфор (P) і калій (K) у ґрунті є важливими поживними елементами для росту та розвитку рослин. Органічна речовина ґрунту також містить N, P, K, Zn, Ca, Mg та інші необхідні для лікарських рослин макроелементи і мікроелементи. Надлишок або дефіцит поживних речовин або незбалансоване співвідношення поживних речовин вплинуть на ріст і розвиток, а також на якість лікарських матеріалів, і різні рослини мають різні потреби в поживних речовинах [
31,
32,
33]. Наприклад, низький рівень N сприяв синтезу алкалоїдів у Isatis indigotica та сприяв накопиченню флавоноїдів у таких рослинах, як Tetrastigma hemsleyanum, Crataegus pinnatifida Bunge та Dichondra repens Forst. Навпаки, занадто велика кількість азоту пригнічує накопичення флавоноїдів у таких видах, як Erigeron breviscapus, Abrus cantoniensis і Ginkgo biloba, і впливає на якість лікарських матеріалів.
34]. Застосування Р-добрива виявилося ефективним для підвищення вмісту гліциризинової кислоти та дигідроацетону в солодці уральській [
35]. Коли кількість нанесення перевищувала 0·12 кг·м−2, загальний вміст флавоноїдів у Tussilago farfara зменшувався [
36]. Застосування P-добрива негативно вплинуло на вміст полісахаридів у традиційній китайській медицині rhizoma polygonati [
37], але добриво K було ефективним у збільшенні вмісту сапонінів [
38]. Застосування добрива 450 кг·год-2 K було найкращим для росту та накопичення сапоніну дворічного Panax notoginseng [
39]. При співвідношенні N:P:K = 2:2:1 загальна кількість гідротермального екстракту, гарпагіду та гарпагозиду була найбільшою [
40]. Високе співвідношення N, P і K було корисним для сприяння росту Pogostemon cablin і збільшення вмісту летючої олії. Низьке співвідношення N, P і K підвищило вміст основних ефективних компонентів олії листя стебла Pogostemon cablin [
41]. YCH є рослиною, стійкою до безплідного ґрунту, і вона може мати особливі вимоги до поживних речовин, таких як N, P і K. У цьому дослідженні, порівняно з культивованим YCH, ґрунт диких рослин YCH був відносно безплідним: вміст ґрунту органічної речовини загальний N, загальний P і загальний K становили приблизно 1/10, 1/2, 1/3 і 1/3 від культурних рослин відповідно. Таким чином, відмінності в поживних речовинах ґрунту можуть бути ще однією причиною відмінностей між метаболітами, виявленими в культивованому та дикому YCH. Вейбао Ма та ін. [
42] виявили, що внесення певної кількості азотних добрив і фосфорних добрив значно покращує врожайність і якість насіння. Однак вплив поживних елементів на якість YCH не ясний, і заходи з удобрення для покращення якості лікарських матеріалів потребують подальшого вивчення.
Китайські трав’яні ліки мають такі характеристики: «Сприятливі середовища проживання сприяють урожаю, а несприятливі покращують якість» [
43]. У процесі поступового переходу від диких до культивованих YCH середовище проживання рослин змінилося з посушливих і безплідних пустельних степів на родючі сільськогосподарські угіддя з більшою кількістю води. Середовище існування культивованого YCH є кращим, а врожайність вищою, що допомагає задовольнити ринковий попит. Однак це чудове середовище існування призвело до значних змін у метаболітах YCH; чи сприяє це покращенню якості YCH і як досягти високоякісного виробництва YCH за допомогою науково обґрунтованих заходів вирощування, потребують подальших досліджень.
Симуляційне культивування в середовищі існування — це метод моделювання середовища існування та умов навколишнього середовища дикорослих лікарських рослин, заснований на знанні довготривалої адаптації рослин до специфічних екологічних стресів [
43]. Моделюючи різні фактори навколишнього середовища, які впливають на дикі рослини, особливо вихідне середовище проживання рослин, які використовуються як джерела справжніх лікарських матеріалів, цей підхід використовує науковий дизайн та інноваційне людське втручання, щоб збалансувати ріст і вторинний метаболізм китайських лікарських рослин [
43]. Метод спрямований на досягнення оптимальних механізмів для розробки високоякісних лікарських матеріалів. Симулятивне культивування середовища існування повинно забезпечити ефективний спосіб високоякісного виробництва YCH, навіть коли фармакодинамічна основа, маркери якості та механізми відповіді на фактори навколишнього середовища неясні. Відповідно, ми пропонуємо, щоб науковий дизайн і заходи з управління полями при вирощуванні та виробництві YCH мали здійснюватися з урахуванням екологічних характеристик дикого YCH, таких як посушливі, безплідні та піщані ґрунтові умови. У той же час є також надія, що дослідники проведуть більш поглиблені дослідження функціональної матеріальної основи та маркерів якості YCH. Ці дослідження можуть забезпечити більш ефективні критерії оцінки для YCH, а також сприяти високоякісному виробництву та сталому розвитку галузі.